您现在的位置:首页 > 产品中心
搜索产品

细胞增殖、毒性各种检测方法的特点与比较
 
  MTT法和Cell Counting Kit-8(CCK-8)法是利用还原性显色试剂与活细胞中脱氢酶反应,通过检测吸光度计算细胞数量的方法。由于该方法简便、安全、重复性好等优点,被广泛应用于细胞增殖、毒性等实验中。
  然而,在检测细胞毒性时,除了MTT法CCK-8法,这类以脱氢酶活性为检测指标的方法外,也可以检测因细胞膜损伤而释放的LDH活性。因为,在利CCK-8法检测细胞毒性时,虽然能得出细胞死亡率,但很难判断是由于细胞数量的减少,还是细胞内脱氢酶活性降低导致的。所以,这时候可以利用细胞体外的LDH活性等其他指标进行检测。
 
【相关产品】
〇 MTT
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------
使用Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST的细胞损伤试验
 
  1960年Nachlas等进行了以游离乳酸脱氢酶(LDH)为指标的细胞损伤试验后,以检测LDH作为一种确认细胞状态方法的相关文献在全球的数量越来越多(图1)。本次例举4篇近年发表过的文献,均通过检测游离LDH确定细胞损伤率。
 
 
图1  同时检测游离LDH及活细胞(MTT、CCK-8等方法)的文献数量变化
(本数据由同仁化学研究所调查)
 
  Watanabe等研究水通道蛋白(AQP,膜蛋白质)的机理及与疾病的关联1)。已知AQP与细胞内水的转运有关,近年的研究表明,AQP也会透过甘油、H2O2等小分子,甚至对细胞增殖及迁移产生影响。Watanabe等为证实AQP-9对H2O2转运的影响,通过利用siRNA得到AQP-9基因沉默的HepG2细胞及H2O2荧光探针(CM-H2DCFDA)进行细胞对外源性H2O2的抑制实验。实验中,利Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST测游离LDH并确定由抑制H2O2转运引起的细胞伤率。结果,对照组正常细胞进行H2O2转运并检测到CM-H2DCFDA荧光,同时检测出游离LDH确认细胞受损。实验组细胞敲除AQP-9,细胞内没有检测出H2O2,并通过测定游离LDH确认没有发生细胞损伤(图2)。
 
 
图2  检测AQP-9敲除的细胞内H2O2及游离LDH
 
  Shu-fang Jin等研究突发性肺纤维化治疗药Pirfenidone(图3)的作用机能,其中合Cell Counting Kit-8(CCK-8)Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST进行评价2)。结果Pirfenidone对老鼠纤维芽细胞C3H10T1/2的增殖及纤维化有一定抑制并能够增强激酶抑制剂XL413的效果,利CCK-8检测XL413加入前后,Pirfenidone对细胞增殖的抑制率,结Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST确认细胞的增殖抑制并非由XL413本身引起。
 
 
图3  Pirfenidone及XL413的结构式
 
  此外,Liping Wu等研究弱酸刺激人上皮细胞(HEECs)ATP的释放,同时确认有无游离LDH增加3)。Wakatsuki等使用6-hydroxydopamine对原代神经细胞诱导凋亡后,以caspase3、Annexin V及游离LDH为指标进行测定4)。对于细胞损伤而言,通过检测几种不同原理的指标进行实验结果的相互验证。我司生产并销售各类细胞增殖、毒性、损伤检测试剂盒及细胞染色等试剂,旨在以此帮助实验者阐明细胞内各类机理。
 
  
《参考文献》
1)  S. Watanabe, et al., Biochem. Biophys. Res. Com., 2016, 471, 191.
2)  S. Jin, et al., Exp. Cell. Res., 2015, 339, 289.
3)  L. Wu, et al., Am. J. Physiol. Gastroinest. Liver Physiol., 2015, 309, G695.
4)  S. Wakatsuki, et al., J. Cell. Biol., 2015, 211, 881.