U.S.A | EUROPE | JAPAN
  • 分 子 式: C46H46N2O23
  • 分 子 量: 994.86
  • 外      观: 白色或浅黄色晶体
  • 别      名: 钙黄绿素
  • 纯      度: 90%以上(HPLC)
  • 储存条件: -20
  • 运输条件: 室温
搜索产品
您现在的位置:首页 > 产品中心 > 细胞染色 > Calcein-AM
Calcein-AM
货号: C326
3',6'-Di(O-acetyl)-4',5'-bis[N,N-bis(carboxymethyl)aminomethyl]fluorescein, tetraacetoxymethyl ester
3'6'-二(O-乙酰基)-4',5'-二【N,N-二(羧甲基)氨甲基】荧光素四乙酸甲酯
CAS号: 148504-34-1
规格
价格
到货期
1 mg2480现货

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

Calcein-AM是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂,Calcein-AM由于在Calcein(钙黄绿素)的基础上加强了疏水性,因此能够轻易穿透活细胞膜。当其进入到细胞质后,酯酶会将其水解为Calcein(钙黄绿素)留在细胞内,发出强绿色荧光。与其它同类试剂(如BCECF-AMCarboxy-fluorescein diacetate)相比,Calcein-AM是最适合作为荧光探针去染活细胞的,因为它的细胞毒性很低。Calcein(钙黄绿素)不会抑制任何的细胞功能如增殖或淋巴球的趋化性。另外,使用了Calcein(钙黄绿素)的活性检测的实验结果是十分可信并且与标准的51Cr-释放法所得结果相一致的。Calcein(钙黄绿素)的激发和发射波长分别为490 nm515 nm

Calcein-AM和碘化丙啶(PI)溶液,它们分别可对活细胞和死细胞染色。Calcein-AM的乙酸甲基酯亲脂性很高,使其可透过细胞膜,通过活细胞内的酯酶作用,Calcein-AM能脱去AM基,产生的Calcein(钙黄绿素)能发出强绿色荧光,因此Calcein-AM仅对活细胞染色。另一方面,作为核染色染料的PI不能穿过活细胞的细胞膜。它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核,并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光(激发:535 nm,发射:617 nm),因此PI仅对死细胞染色。由于Calcein(钙黄绿素)PI-DNA都可被490 nm激发,因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545 nm激发,仅可观察到死细胞。根据以上特点,Calcein-AM和碘化丙啶(PI)经常被结合用来作为活细胞和死细胞的双重染色。

由于不同细胞系的最佳染色条件不同,我们建议个别确定Calcein-AMPI的合适浓度。

染色例:

 

 

 

 

 

 

染色过程:
1 DMSO制备1 mM Calcein-AM溶液,并用PBS将其稀释制成1-50 μMCalcein-AM溶液。a)
2
1/10细胞培养基体积的Calcein-AM溶液加入到细胞培养基中。b)
3 37培养细胞15-30分钟。
4 PBS或适当的缓冲液洗涤细胞两次。
5 490 nm激发波长,515 nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。
a)  如果Calcein-AM很难进入细胞,可以使用表面活性剂,如Pluronic F127
b)  或者您也可以用1/10浓度的Calcein-AM溶液代替培养基。

 

Calcein-AM可以用来进行活细胞、死细胞的双重染色
钙黄绿素-AM(Calcein-AM)和碘化丙啶(PI)溶液,它们分别可对活细胞和死细胞染色。Calcein -AM的乙酸甲基酯亲脂性很高,使其可透过细胞膜。尽管Calcein -AM本身并不是荧光分子,但通过活细胞内的酯酶作用,Calcein -AM能脱去AM基,产生的Calcein能发出强绿色荧光(激发:490 nm,发射:515 nm)。因此Calcein -AM仅对活细胞染色。另一方面,作为核染色染料的PI不能穿过活细胞的细胞膜。它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核,并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光(激发:535 nm,发射:617 nm)。由于CalceinPI-DNA都可被490 nm激发,因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545 nm激发,仅可观察到死细胞。由于不同细胞系的最佳染色条件不同,我们建议个别确定PICalcein -AM的合适浓度。

 

I.试剂
Calcein-AM
PI

 

II.用荧光显微镜观察细胞形态

HeLa细胞染色为例,请注意不同的细胞种类、不同浓度有不同的观察条件。根据细胞条件,摸索不同条件下的细胞贴壁情况和试剂浓度的配制等最佳条件。
1
.染色溶液的配制
1
)用1 ml无水DMSO溶解1 mg Calcein-AM,制备成1 mmol/l Calcein-AM储备液,-20下密闭冷冻保存。
2
)用1 ml ddH2O溶解1 mg PI,制备成1.5 mmol/lPI储备液(1 mg PI/1 ml H2O),-20下密闭冷冻保存。
3
)将Calcein-AM储备液和PI储备液放置于室温。
4
)加10 μl  Calcein-AM储备液和15 μl  PI储备液至5 ml PBS中配制成染色溶液。
  Calcein-AM
的终浓度为2μmollPI的终浓度为4μmoll

 

2.细胞染色
1
)染色HeLa细胞等贴壁细胞时,先用Trypsin-EDTA等消化细胞,制备成细胞悬液。 
2
)将细胞悬液离心3分钟(1,000 rpm)
3
)去除上清液,加入PBS缓冲液,细胞数量调整至105 –106 个/ml。再用移液器充分混匀。
4
)由于培养基中的血清等含有酯酶,Calcein-AM遇水会分解,会导致空白上升,所以需要离心数次,用PBS洗涤数次直到完全洗净。
5
)将200 μl细胞悬液移至小试管中,加入100 μl染色溶液,在37下孵育15分钟。
6
)在盖玻片上滴加适量的染色的细胞溶液。
7
)在荧光显微镜下,先使用490±10nm波长激发,观察黄绿色的活细胞,还可以同时观察到红色的死细胞,然后用545 nm波长激发,能够看到红色的死细胞。
*
在荧光显微镜下观察时,如果背景高,可以用培养基清洗掉细胞外的染料后再观察。
*Calcein-AM
溶液和PI溶液可以混合在一起染色,也可以分开进行染色,加入的先后顺序没有影响。

 

3.染色试剂的最佳浓度
Calcein-AM
PI的最适浓度是根据不同的细胞种类而定,通过以下的操作,我们可以找到不同细胞染色试剂的最佳浓度。
1
)通过在0.1%皂苷或0.1-0.5%毛地黄皂苷中孵育10分钟或通过在70%乙醇中孵育30分钟制备死细胞。
2
)用0.1-10 μM PI溶液对死细胞染色,以便找到仅对细胞核染色而不对细胞质染色的PI浓度。
3
)用0.1-10 μM Calcein-AM溶液对死细胞染色,以便找到不对细胞质染色的Calcein -AM浓度。接着用该浓度的Calcein -AM对活细胞染色以检验活细胞可否被染色。

 

III.注意事项
1
Calcein-AMester部位遇到湿气会分解,使用后请在-20下密闭冷冻保存,防止水分进入。Calcein-AM储备液用缓冲液或培养基等稀释时尽量现配现用。
2
PI溶液在冷冻的条件下可以保存一年。PI有引致癌的可能性,请在使用时注意以下3点。
 ·
使用时一定要带手套、眼罩、口罩。
 ·
万一接触到皮肤的话,迅速使用大量水清洗。
 ·
处理方法
使用器具的洗涤液等废液请按照不同的处理方法来处理,或者按照如下的处理方法,分解后再丢弃。用UV照射或光照分解。用次氯酸钠氧化分解后,做中和处理。

如何进行细胞染色

详情参见操作说明集<如何进行细胞染色>部分

如何使用Calcein-AM和PI进行活细胞、死细胞双重染色

详情参见操作说明集<如何进行活细胞、死细胞的双重染色>部分