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DALGreen - Autophagy Detection
货号: D675

DALGreen - 细胞自噬荧光探针
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20 nmol x 12980现货

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通过观察自噬溶酶体检测自噬

细胞自噬是细胞内损坏的蛋白质或细胞器降解和循环利用的过程。

DALGreen是一种可以进入细胞膜检测细胞自噬的小分子脂溶性荧光染料,具有在酸性环境中产生荧光的特性,可以检测到自噬体与溶酶体融合形成的自噬溶酶体。

 

Q:DALGreen working solution的稳定性如何?

A:无法长期保存,请现配现用。

Q:DMSO stocking solution的稳定性如何?

A:配制后请于-20℃保存,一个月内可保持稳定。另外建议根据用量分装保存。

Q:是否有与自噬相关的蛋白质敲除和评估的实例?

A:与自噬小体成膜有关的ULK1ULK2敲除的细胞与野生型细胞饥饿诱导,用DALGreen染色后评价的实例是有的。

    实验结果显示,与ULK1/ULK2敲除的细胞相比,野生型细胞中的DALGreen荧光信号增大。这次实验的具体数据请参照下面这篇论文的Supporting Information (Fig. S5)

    另外,自噬的标记物LC3-RFPDALGreen的共染色结果显示,大多数的染色Puncta(斑点,位点)都高度一致。本实验的数据,请参考下面论文的Fig.1

H. Iwashita, H. T. Sakurai, N. Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, K. Okuma, S. Shimizu, and Y. Ueno, "Small fluorescent molecules for monitoring autophagic flux", FEBS Letters., 2018, 592, (4), 559–567.

    论文的原文链接在本产品的网站页面上。

    网站链接(日语)http://dominoweb.dojindo.co.jp/goodsr7.nsf/View_Display/D675?OpenDocument

Q:在进行延时成像时有什么要注意的地方吗?

A:为了确定最佳实验条件,请先进行预实验。

由于试剂的特性,刚刚染色后有荧光值升高的趋势,因此,请参照以下步骤进行预实验和延时成像。

1.预实验

 - 使用对照细胞(不诱导自噬的细胞)

 - 根据说明书的步骤用Working Soluiton染色后,用培养基洗涤两次。

 - 加入正常培养基后,观察荧光随时间的变化。

 - 如下图所示,染色后的细胞在荧光强度阶段性降低之后,确认荧光强度变化趋于稳定的时间段(图中的T)。

条件可能因细胞种类而异。

(参考)

HeLa细胞的话,染色后约60分钟后,荧光确定会趋于稳定(DALGreen)

2.延时染色成像

 - 细胞用Working Solution染色后,在培养基中37 ℃培养。

培养时间为预实验中摸索出的染色时间。

染色后不要立刻进行自噬诱导。

 -培养后进行自噬诱导并开始延时染色成像。

(参考)

DALGreenHeLa细胞进行染色,在正常的培养基中培养60分钟(预实验中摸索的时间)后,进行自噬诱导。

Q:这个产品和溶酶体染色试剂有什么区别吗?

A:溶酶体染色试剂会定位于细胞内的溶酶体里。而DALGreen是在进入自噬小体后,当自噬小体与溶酶体结合后,荧光变强。

    因此,当溶酶体染色试剂和DALGreen共染色的时候,溶酶体染色试剂发出的荧光与自噬小体的部分DALGreen的荧光发生重叠。

    本实验的数据,请参考下面论文的Supporting Information (Fig.S5)

H. Iwashita, H. T. Sakurai, N. Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, K. Okuma, S. Shimizu, and Y. Ueno, "Small fluorescent molecules for monitoring autophagic flux", FEBS Letters., 2018, 592, (4), 559–567.

    论文的原文链接在本产品的网站页面上。

网站链接(日语)http://dominoweb.dojindo.co.jp/goodsr7.nsf/View_Display/D675?OpenDocument

Q:推荐使用的滤光片?
 A:激发波长:350~450 nm;
       发射波长:500~560 nm;
另外,利用激光共聚焦显微镜的488 nm激发波长也可以检测,请参考我们公司网站产品页面的实验例。