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Live Cell Labeling Kit – CFSE
货号: LC01

活细胞标记试剂盒-CFSE
CAS号:
规格
价格
到货期
50 μg × 3880现货

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荧光试剂CFSE在活细胞内能停留较长时间,可以用来观察活细胞的长期生长活动。CFSE是一种带有琥珀酰亚胺(NHS)的荧光染料,可以结合细胞内的蛋白质。CFSE在结构上将酚羟基部位改造成AM体,所以自身不发荧光,荧光背景低,脂溶性高,能够轻易穿透细胞膜,进入细胞内的CFSE的AM部位能被细胞内酯酶水解发出绿色荧光。且CFSE的琥珀酰亚胺(NHS)和细胞内蛋白质的氨基部位结合,固定在细胞内,不会漏出细胞外。在细胞分裂增殖过程中,它的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减,标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强度是亲代细胞的一半,根据这一特性,它可被用于检测细胞增殖。CFSE标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久,用荧光显微镜等仪器可观察活细胞的生长、分裂、融合等长期活动。
荧光波长:λex=496 nm, λem=516 nm

染色例:

 

 
 
 
 
 
 
 
 

试剂盒内含
CFSE 50 μg × 3管
PBS(-)片剂      3片
DMSO  1 mL × 1管 *外带
*如果从冰箱里取出试剂盒马上打开使用,CFSE和DMSO易吸湿造成CFSE水解,影响标记效果,请务必先放至室温后再打开。
*打开DMSO瓶子取样后,请迅速密闭盖子,避免DMSO吸湿。条件允许的话,请将DMSO瓶子放在干燥器中在冷暗处保存。

贮藏条件
在-20℃的避光条件下保存

所需设备
- 培养箱(37 ℃ CO2)
- 移液器(20 μL, 1000 μL)
- 荧光显微镜 (蓝色激发滤光片,绿色发射滤光片)
- 流式细胞仪(488 nm 光源, 绿色发射滤光片)

细胞染色
配制试剂
1. 取PBS(-)1片加入100mL容量瓶中,用纯水溶解并将体积调至100mL。
2. 取50μL DMSO加到CFSE管中溶解,配成CFSE母液。
3. 取25.0mL的PBS(-)溶液,加到50μL的CFSE母液中,配成CFSE溶液。
*用DMSO溶解的CFSE母液在水溶液中会分解,所以CFSE溶液应现配现用,若保存时间长会影响染色效果。
*如果从冰箱里取出试剂盒马上打开使用,CFSE和DMSO易吸湿造成CFSE水解,影响标记效果,请务必先放至室温后再打开。
*打开DMSO瓶子取样后,请迅速密闭盖子,避免DMSO吸湿。条件允许的话,请将DMSO瓶子放在干燥器中在冷暗处保存。

染色细胞
1. 准备细胞悬液,用PBS(-)等合适的培养基a)调整细胞浓度至约107/mL
2. 
1mL细胞悬液至试管中,加入5-15μLCFSE溶液,轻轻搅拌混匀。
3. 
37 培养箱中培养5-10分钟b)
4. 
离心后去上清,加入2mL PBS溶液,再离心后去上清,重复此操作一次。
5. 
加入合适的培养基制成细胞悬液。
6. 
10μL的细胞悬液滴在载玻片上,用荧光显微镜观察,看到荧光后,
根据自己实验的要求调整细胞数量 c) 进行实验。

    a) 尽可能用不含血清的培养基,血清中的酶和蛋白质会分解CFSE,可能会影响染色效果。
    b) 要根据细胞种类摸索最佳染色条件,若荧光强度不够或死细胞过多,需调整CFSE溶液的用量和培养时间。
    c) 根据不同的实验目的和要求,采用稀释的方法调整细胞数量。

实验操作: