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Lactate Assay Kit-WST
货号: L256

乳酸检测试剂盒
CAS号:
规格
价格
到货期
50次3080现货
200次6770现货

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献
        乳酸是细胞的一种主要代谢途径-糖酵解的代谢产物,也是肌肉疲劳和高乳酸血症的重要生物标志物。
它还可以作为监测细胞内代谢途径变化的标志物。此外,最近的代谢研究表明,乳酸是组织和癌细胞的三
羧酸循环中碳的主要来源。
        Lactate Assay Kit-WST可用于定量检测糖酵解代谢产生的乳酸,并优化了定量过程。本试剂盒通过
测定WST的显色反应来定量细胞上清液中的乳酸含量,可用96孔板检测,灵敏度高,最低可检测到0.02 mmol/l
的乳酸。
        详情请见说明书。
 
《乳酸检测原理》
本试剂盒通过测定WST的显色反应来定量细胞培养液和细胞内的乳酸含量。
试剂盒中含有乳酸标准液,可以通过制备标准曲线来定量样品中的乳酸浓度。
《试剂稳定性高》
各个公司试剂稳定性比较
《操作简单,只需要加入试剂》
 
《把乳酸作为检测指标的相关研究报告》
在癌症研究领域,由于Warburg效应的发现,对乳酸的评价变得越来越重要。
近年来,在糖尿病和干细胞研究等方面,也开始把乳酸作为评价指标。
《显示代谢与疾病之间关系的报告例》
在评估癌症、糖尿病等的疾病模型及线粒体功能时,使用细胞内代谢状态作为常用指标。
在下表中介绍使用乳酸和NAD+/NADH作为指标进行评估的实例。
 
Q:如果需要检测细胞内乳酸含量怎么做?
A:请参考以下操作步骤。
(1)     用微型管收集细胞(1×105细胞*1)。
(2)     离心2 min300×g)后去除上清液。
(3)     加入300 μl PBS(冷),用移液器使其重悬,再离心2 min300×g)后去除上清液。
(4)     加入300 μl细胞裂解液*20.1Triton-X)并涡旋1 min,制成细胞裂解液。
(5)     离心5 min8000×g),收集上清液。
(6)     将步骤(5)所得溶液用超滤离心管(PALLNo.OD010C3,滤膜分子量:10K*3去除蛋白质,得到待测样品。
*1样品为HeLa细胞时,为了检测出0.02 mmol/l以上的乳酸含量,需要1×10的细胞甚至更多。
*2若细胞裂解液中含有SDS会抑制显色,因此避免使用含有SDS的缓冲液。
*3内源性乳酸脱氢酶(LDH)会导致背景高,因此通过脱蛋白处理除去内源性乳酸脱氢酶(LDH)。
Q:配置后的Working solution稳定性如何,可以保存多久?
 AWorking solution需要现配现用。
    光会影响Working solution的稳定性,所以配置后请用铝箔纸包裹。
    配置后的Working solution在室温避光条件下可以保存4 h
    (Working solution光照后,溶液的颜色会从红色变为橙色,背景会升高。)
Q:为什么我的样品孔没有显色?
A:样品中的乳酸浓度可能低于检测限(0.02 mmol / l)。
  乳酸浓度低于0.02 mmol / l的样品无法用该试剂盒检测,因此请考虑其他方法,如LC-MS
  如果待测样品被稀释,则稀释样品中含有的乳酸浓度可能低于0.02 mmol / l
  请减少稀释比例,从而将检测样品的乳酸浓度调整到最低检测限以上。
Q:是否可以检测含有还原性物质的样品?
 A:如果样品中含有还原性的物质,则WST染料也会发生显色,此时无法准确定量乳酸浓度。
    实验中如遇到以上情况,可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂),
    并将标准品孔和样品孔的吸光度分别减去药物对照的吸光度。
Q:该试剂盒可以定量D-Lactate吗?
 A:该试剂盒是用于L-Lactate的定量,无法定量D-Lactate
Q:是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测?
 A:也可以使用490 nm的滤光片。 但是,吸光度会低于在450nm处的吸光度。
Q:一个试剂盒可以检测样品的数量。
 A:制备标准曲线和样品(n = 3)时,可以检测的样品数量如下所示。
 
50 tests
200 tests
样品数量n=3时)
8个样品(参照下图)
48个样品
(制备2次标准曲线检测时)
制备标准曲线:检测8个浓度梯度的标准品(n=3
0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25,0.5, 1 mmol/l

 

96孔板排列示意图(n=3