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  • 分 子 式: C27H34I2N4
  • 分 子 量: 668.39
  • 外      观: 橙红色溶液
  • 别      名: PI Solution
  • 纯      度: 通过检测(TLC)
  • 储存条件: -20
  • 运输条件: 室温
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PI Solution
货号: P378
3,8-Diamino-5-[3-(diethylmethylammonio)propyl]-6-phenylphenanthridinium diiodide,aqueous solution
3,8-二氨基-5-[3-(二乙基家氨基)丙基]-6-苯基啡啶二碘,水溶液
CAS号: 25535-16-4(PI)
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1 ml982现货

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 荧光染料PI(碘化丙啶)是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,常用于细胞凋亡检测,英文全称是Propidium Iodide。它是一种溴化乙啶的类似物,在嵌入双链DNA后释放红色荧光。尽管PI不能通过活细胞膜,但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用,能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535 nm和615 nm。


染色例:

 

 
 
 
 
 
 
 PI可以用来进行活细胞、死细胞的双重染色

钙黄绿素-AM(Calcein-AM)和碘化丙啶(PI)溶液,它们分别可对活细胞和死细胞染色。Calcein -AM的乙酸甲基酯亲脂性很高,使其可透过细胞膜。尽管Calcein -AM本身并不是荧光分子,但通过活细胞内的酯酶作用,Calcein -AM能脱去AM基,产生的Calcein能发出强绿色荧光(激发:490 nm,发射:515 nm)。因此Calcein -AM仅对活细胞染色。另一方面,作为核染色染料的PI不能穿过活细胞的细胞膜。它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核,并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光(激发:535 nm,发射:617 nm)。由于CalceinPI-DNA都可被490 nm激发,因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545 nm激发,仅可观察到死细胞。由于不同细胞系的最佳染色条件不同,我们建议个别确定PICalcein -AM的合适浓度。 

I
.试剂 
Calcein-AM  
PI 

II
.用荧光显微镜观察细胞形态 
 
HeLa细胞染色为例,请注意不同的细胞种类、不同浓度有不同的观察条件。根据细胞条件,摸索不同条件下的细胞贴壁情况和试剂浓度的配制等最佳条件。 
1.染色溶液的配制 
1
)用1 ml无水DMSO溶解1 mg Calcein-AM,制备成1 mmol/l Calcein-AM储备液,-20下密闭冷冻保存。 
2
)用1 ml ddH2O溶解1 mg PI,制备成1.5 mmol/lPI储备液(1 mg PI/1 ml H2O),-20下密闭冷冻保存。 
3
)将Calcein-AM储备液和PI储备液放置于室温。 
4
)加10 μl Calcein-AM储备液和15μl  PI储备液至5 ml PBS中配制成染色溶液。 
  Calcein-AM
的终浓度为2 μmollPI的终浓度为4μmoll 

2
.细胞染色 
1
)染色HeLa细胞等贴壁细胞时,先用Trypsin-EDTA等消化细胞,制备成细胞悬液。     
2
)将细胞悬液离心3分钟(1,000 rpm) 
3
)去除上清液,加入PBS缓冲液,细胞数量调整至105 –106 个/ml。再用移液器充分混匀。 
4
)由于培养基中的血清等含有酯酶,Calcein-AM遇水会分解,会导致空白上升,所以需要离心数次,用PBS洗涤数次直到完全洗净。 
5
)将200 μl细胞悬液移至小试管中,加入100 μl染色溶液,在37下孵育15分钟。 
6
)在盖玻片上滴加适量的染色的细胞溶液。 
7
)在荧光显微镜下,先使用490±10 nm波长激发,观察黄绿色的活细胞,还可以同时观察到红色的死细胞,然后用545 nm波长激发,能够看到红色的死细胞。 
*
在荧光显微镜下观察时,如果背景高,可以用培养基清洗掉细胞外的染料后再观察。 
*Calcein-AM
溶液和PI溶液可以混合在一起染色,也可以分开进行染色,加入的先后顺序没有影响。 

3
.染色试剂的最佳浓度 
Calcein-AM
PI的最适浓度是根据不同的细胞种类而定,通过以下的操作,我们可以找到不同细胞染色试剂的最佳浓度。 
1
)通过在0.1%皂苷或0.1-0.5%毛地黄皂苷中孵育10分钟或通过在70%乙醇中孵育30分钟制备死细胞。 
2
)用0.1-10 μM PI溶液对死细胞染色,以便找到仅对细胞核染色而不对细胞质染色的PI浓度。 
3
)用0.1-10 μM Calcein-AM溶液对死细胞染色,以便找到不对细胞质染色的Calcein -AM浓度。接着用该浓度的Calcein -AM对活细胞染色以检验活细胞可否被染色。 

III
.注意事项 
1
 Calcein-AMester部位遇到湿气会分解,使用后请在-20下密闭冷冻保存,防止水分进入。Calcein-AM储备液用缓冲液或培养基等稀释时尽量现配现用。 
2
PI溶液在冷冻的条件下可以保存一年。PI有引致癌的可能性,请在使用时注意以下3点。  
 · 
使用时一定要带手套、眼罩、口罩。 
 · 
万一接触到皮肤的话,迅速使用大量水清洗。 
 · 
处理方法 
使用器具的洗涤液等废液请按照不同的处理方法来处理,或者按照如下的处理方法,分解后再丢弃。用UV照射或光照分解。用次氯酸钠氧化分解后,做中和处理。