当满足以下条件时，可以不在标记前使用过滤管： a）蛋白带有二硫基并且溶液中不含带有巯基或二硫基的小分子。蛋白浓度在10 mg/ml 或70 μM左右：将10 μl蛋白溶液和100 μl Reducing agent溶液混合，并从第4步开始按照操作说明继续后续试验。 b）蛋白带有巯基且溶液中不含带有巯基的小分子。蛋白浓度在10 mg/ml 或70 μM左右：将10 μl的蛋白溶液和90 μl Reaction buffer混合，并加入8 μl SH-reactive biotin溶液。然后从第7步开始按照操作说明进行后续试验。
不一定要使用WS buffer，可以使用任何适合该实验的缓冲液。
在0-5℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下（只要该蛋白可以冷冻）存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。
IgG的最小量为10 μg。10 μg-100 μg的IgG的标记比率是一样的。